Перечень молекулярно-генетических тестов

(DPD Dihydropyridine Dehydrogenase мутация)

Определение и диагностическое значение

При дефиците DPD в норме ингибируется фермент катаболизма 5-FU, связанный с токсичными проявлениями 5-FU. Наиболее частая мутация IVS14+1G>A приводит к подавлению ферментативной активности DPD, и, как следствие, к накоплению токсичных продуктов обмена веществ. Химиотерапия у пациентов с 5-FU-токсичностью приводит к лихорадке, диарее, стоматиту, лейкопении, панцитопении. Таким образом, генетический тест позволяет выявить пациентов, которым следует проводить терапию 5-FU с осторожностью.

Образцы и метод

Для данного анализа необходимо 0.5-3.0 мл EDTA-крови. Образцы должны быть доставлены в нашу лабораторию в течение 48 год после забора крови. Тестовую бумагу не использовать. Мутация IVS14+1G>A определяется методом ПЦР и секвенирования ДНК. Специфичность этой процедуры близка к 100%.

Срок выполнения 18 дней.

Определение и диагностическое значение

Ожирение считается одним из самых распространенных факторов риска. В настоящее время генетики выяснили, что уже в раннем детстве индекс массы тела связан со склонностью к ожирению. Одна инверсия нуклеотидов T>A в FTO-гене (ген, который связан с жировой массой и ожирением), который локализован в 16 хромосоме, является причиной появления лишнего веса и повышает риск ожирения. Гомозиготные носители этой мутации (А/а аллель) имеют массу тела в среднем на 3 кг выше нормы, а риск ожирения у них повышается в 1,7 раза. Частота А/а аллели в общей популяции составляет 16%. Генетический тест позволяет определить детей из группы риска и принять необходимые меры как можно раньше.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Анализ, основанный на методе ПЦР, включает ДНК-секвенирование интрона 1 FTO, который содержит мутацию. Специфичность близка к 100%.

Срок выполнения 14 дней.

Определение и диагностическое значение

Альфа 1-антитрипсин - важный ингибитор протеазы (PI*) в легких. Две распространенные мутации под названием PI*Z и PI*S могут инактивировать альфа-трипсин. Болезнь возникает в результате наследования мутации от обоих родителей. Дефицит проявляется понижением концентрации бронхоальвеолярной лаважной жидкости, печеночными включениями и обструкцией легких в большинстве клинических случаев. Дефицит может также способствовать развитию иммунологических болезней. Курение ускоряет появление клинических симптомов, таких как бронхит или астма. Этот тест также используется в пренатальной диагностике. В этом случае, настоятельно рекомендуется заказать анализ крови родителей перед или во время пренатальной диагностики.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Анализ на основе метода ПЦР включает ферментативное расщепление и электрофорез фрагментов ДНК, которые содержит PI-мутации. Специфичность близка к 100%

Срок выполнения 14 дней

Определение и диагностическое значение

Генетический тест на аполипротеин Е настоятельно рекомендуется в случае проявления первых симптомов поздней БА. По мнению Национального Института Здоровья, Бифезда, у носителей аллели ApoE-4 в 20 раз повышается риск развития поздней и спорадической БА. Генетический анализ позволяет заранее выявить патологию и принять необходимые меры.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD или кровь на EDTA. Метод ПЦР и рестрикционный анализ фрагментов достоверно определяют все три варианта: ApoE-2, ApoE-3, ApoE-4 в их гомозиготном или гетерозиготном состоянии.

Срок выполнения 14 дней

Определение и диагностическое значение

Низкие концентрации ЛПВП-холестерола в плазме связаны с повышением риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Такая обратная зависимость объясняется функцией ЛПВП-частиц, которые переносят холестерол из периферических клеток обратно в печень. Эффективность этого транспорта во многом зависит от наличия центральной составляющей ЛПВП - неповрежденных молекул аполипопротеина А. Очень важен тот факт, что у носителей гетерозиготных мутаций в экзоне 1-4 концентрации ЛПВП и АРО-А-І на 50% ниже, чем у представителей нормального генотипа (соответственно <30 и 70 мг/дл).

Генетический тест позволяет выявить пациентов со склонностью к сердечно-сосудистым заболеваниям и помогает назначить терапевтические мероприятия.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. ПЦР анализ включает ДНК-секвенирование экзонов 1-4 APOA1-гена, в том числе промоторного участка. Специфичность близка к 100%.

Срок выполнения 4 недели

Определение и диагностическое значение

У пациентов встречаются различные формы астматической обструкции дыхательных путей. Нечувствительность пациентов к лечению 5-липоксигеназными модификаторами объясняется генетическими отклонениями в области управляющего участка гена 5-липоксигеназы (ALOX5 промотор). Фактически, астматики, которые не отвечают на терапию антагонистами лейкотриеновых рецепторов, являются носителями делеции и инсерции в ALOX5-промоторе. Генетический тест позволяет выявить этих пациентов и назначить им альтернативное медикаментозное лечение.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Анализ на основе метода ПЦР включает ферментативное расщепление и электрофорез фрагментов ДНК, которые содержат ALOX5 промотор – делеции и инсерции. Специфичность близка к 100%.

Срок выполнения 14 дней

(врожденное двустороннее отсутствие семявыводящих протоков, ВДОСП)

Определение и диагностическое значение

Мужское бесплодие может быть следствием ВДОСП. Аберрация гена муковисцидоза является причиной ВДОСП в 60-80% случаев. Носители болезни передают аберрацию своим детям с вероятностью 25%. У большинства пациентов симптомы муковисцидоза не проявляются. Необходимость проведения генетического теста возникает, когда есть клиническое подозрение на азооспермию, или есть семейная склонность к муковисцидозу, или же азооспермия выражена.

Патологию имеют только те мужчины, у которых обе аллели - 5Т (гомозиготные носители) или которые несут 5Т аллель и одну дополнительную мутацию CFTR на второй аллели. Супруги-пациенты должны сделать генетический анализ, чтобы определить риск передачи ВДОСП или муковисцидоза следующему поколению.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Анализ ПЦР позволяет обнаружить политимитидиновую последовательность в 8 интроне (5Т вариация), которая является характерной чертой ВДОСП, а также наиболее распространенные 33 мутации CFTR гена. Для этой цели используется Oligo-Ligation-Assay (Applied Biosystems). Мутации достоверно определяются с помощью секвенатора ABI.

Срок выполнения 18 дней

Определение и диагностическое значение

Ниже перечислены основные критерии для генетического теста на BRCA1/2 мутации: женщины, которые имеют больше двух родных или двоюродных родственников с раком груди или яичников; рак в раннем возрасте; двусторонний рак груди; родственник с множественными случаями рака; мужчины с раком груди в семье.

BRCA 1 и BRCA 2 - гены склонности к раку. В норме они регулируют рост клеток. Однако, мутации в этих генах могут изменить их нормальные функции, что повышает риск развития рака. Мутации в этих генах (Breast Cancer Gene 1- BRCA 1, и Breast Cancer Gene 2 - BRCA 2) обнаружены у 65% женщин с наследственным раком груди и яичников. Если обнаружена мутация в одном из этих генов, риск развития рака в течение жизни сильно возрастает. Вероятность развития рака груди в течение жизни может колебаться в районе 70-80% в зависимости от семейной истории. Вероятность развития рака груди в течение жизни будет составлять 40-60% в случае мутации BRCA 1 и 15-20% - в случае мутации BRCA 2. Носитель мутации BRCA 1 или BRCA 2 имеет риск 50% передать это нарушение своим детям, независимо от пола ребенка.

В случае если была обнаружена мутация, ассоциированная с болезнью, IMMD предоставит вам подробное описание результатов теста и интерпретацию данных по оценке риска.
Независимо от этого клинического отчета мы настоятельно рекомендуем проконсультироваться у вашего доверенного врача, чтобы обсудить, какие шаги должны быть предприняты для ранней диагностики и предотвращения болезни.

Образцы и метод анализа

Необходимо отправить в нашу лабораторию IMMD тестовую бумагу. Используется метод Fluorescence Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) на ABI 377, или Denaturating High Pressure Liquid Chromatography (DHPLC) by WAVE, а также секвенирование фрагментов гена, которые содержат предполагаемые мутации, для точного определения последовательности ДНК каждой из мутаций. BRCA 1 и BRCA 2 всегда исследуются вместе.

Сроки выполнения теста 3 месяца.

Определение и диагностическое значение

10% всех колоректальных карцином являются наследственно обусловленными. Наиболее распространенная форма ННРТК характеризуется проявлением в раннем возрасте колоректального рака, небольшим количеством колоректальных полипов и проблемами вне толстой кишки (эндометрий, желудок, урогенитальные пути и др.). Поскольку не существует надежных фенотипических показателей для раннего клинического выявления заболевания, генетический тест является единственным достоверным вариантом диагностики. Мутации в двух генах, которые обозначаются MLH 1 и MSH 2, являются причиной более чем 95% всех случаев ННРТК.

На основании генетико-эпидемологических исследований, нижеперечисленные критерии требуют проведения генетического теста:

• больше трех членов семьи страдают заболеванием рака толстой кишки или
• других онкологических заболеваний желудка и кишечника, или
• два ближайших родственника имеют рак толстой кишки или
• в двух следующих поколениях в одной семье встречалось заболевание или,
• по крайней мере, один член семьи заболел раком толстой кишки в возрасте до 50 лет.

Тест, который проводится в IMMD, позволяет определить 95% всех возможных мутаций и делеций. У носителей мутаций могут возникать не только колоректальные карциномы, а также, например, различные гинекологические онкозаболевания.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Используется метод Fluorescence Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) на ABI 377 или Denaturating High Pressure Liquid Chromatography (DHPLC) by WAVE, секвенирование фрагментов гена, которые отличаются от нормального контроля. Каждый клинический отчет в точности определяет мутацию, которая ассоциируется с болезнью.

Срок выполнения теста 3 месяца.

Микросателлитная нестабильность (MSI) для выявления наследственной предрасположенности.

Определение и диагностическое значение

10% колоректальных карцином являются наследственно обусловленными. Наиболее распространенная форма ННРТК проявляется возникновением колоректального рака в раннем возрасте, небольшим количеством колоректальных полипов и проблемами вне толстой кишки (эндометрий, желудок, урогенитальные пути и другое).

MSI возникает из-за проблем в системе репарации ошибок, которые возникают во время репликации ДНК, и характеризуется усиленным накоплением единичных нуклеотидных мутаций и изменением длины микросателлитных последовательностей, которые повторяются. Наличие MSI в ткани опухоли обусловлено определенными уникальными клиническими и патологическими особенностями. Эта особенность ННРТК заключается в том, что MSI определяется в большинстве опухолей ННРТК и в некоторых ненаследственных колоректальных опухолях. Поэтому настоятельно рекомендуется проведение анализа (как прескрининга) на MSI у пациентов, больных ННРТК, т.к. он позволяет выявить пациентов, которым следует назначить более широкое исследование мутаций MLH1 и MSH2.

Образцы и метод анализа

Необходимы свежие или фиксированные образцы опухоли. Рекомендуется микродиссекция патологических образцов для обогащения неопластической ткани; нормальная ткань нужна для подтверждения наличия MSI. Тест обнаруживает MSI путем продуцирования ПЦР фрагментов в соответствии с микросателлитными маркерами BAT25, BAT26, D10S197, D13S175 И D18S69. Фрагментный анализ проводится на ABI-секвенаторе.

Срок 14 дней.

(дефицит 21-гидроксилазы, адреногенитальный синдром AGS)

Определение и диагностическое значение

AGS обусловлен наследственными дефектами ферментативных этапов биосинтеза кортизола. Поскольку кортизол является одним из ключевых регуляторов адренокортикотропной секреции гормонов, снижение уровня кортизола приводит к хронической гиперстимуляции секреции адренокортикотропных гормонов, и, в результате, к гиперплазии коры надпочечников. Генетически обусловленное снижение уровня кортизола может быть вызвано наследственными мутациями в ферменте 21-гидроксилазы (ген CYP21). Пациенты, гетерозиготные по дефициту 21-гидроксилазы клинически не имеют отклонений. Однако уже при рождении у них умеренно повышается уровень 17α-гидроксипрогестерона. В результате повышенного продуцирования надпочечниками половых гормонов лица женского пола рождаются с вирилизированными наружными половыми органами. Потенциально летальная недостаточность надпочечников характерна для 2/3-2/4 пациентов с классической формой солевой недостаточности при AGS. AGS обнаруживается у 1:12 000 новорожденных. В случае, когда дети являются носителями мутации CYP21 или оба родителя являются гетерозиготными, рекомендуется ранняя терапия с применением дексаметазона. Если оба родителя являются носителями мутации CYP21, рекомендуется пренатальное генетическое исследование.

Образцы и метод анализа

5-10 мл крови на EДTA. Образцы должны быть доставлены в нашу лабораторию в течение 48 часов после забора. Тестовую бумагу не использовать. Должна быть проведена полная секвенация гена CYP21.

Проводится MLPA-исследование (Multiplex-Ligation зависимая ПЦР) с целью определения CYP21 делеции, дупликации или конверсии. Кроме того, чтобы достичь уровня чувствительности почти 100%, можно применить блоттинг по Саузерну.

Срок выполнения 4-6 недель

Определение и диагностическое значение

Приблизительно 1:15 новорожденных являются носителями мутации в так называемом гене фиброзно-кистозного регулятора трансмембранной проводимости (ген CFTR). Мутации в этом гене вызывают муковисцидоз. Причиной развития заболевания является мутация в обеих аллелях, унаследованных от отца и матери (гомозиготные носители). Если у обоих родителей обнаружена мутация, вероятность рождения ребенка с муковисцидозом составляет 25%. Типичными симптомами являются частые ОРВИ в раннем детстве, диарея, недобор по массе и запоры у новорожденных. Из-за сходства симптомов муковисцидоз трудно отличить от астмы, бронхита или коклюша. При получении положительного результата потового теста, генетический тест является единственным методом достоверной диагностики муковисцидоза.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Тест позволяется определить 33 наиболее распространенные мутации гена CFTR. Это означает, что около 85% всех возможных мутаций будут проанализированы. Тест основан на методе мультиплексной ПЦР и Oligo Ligation Assay (OLA). Специфичность этой процедуры составляет почти 100%.

Срок выполнения - 18 дней

(Наследственная склонность к тромбозу)

Определение и диагностическое значение

Наличие мутации фактора V Ляйдена хорошо коррелирует с подавлением APC. В 95% всех случаев у носителей мутации отсутствует ответ на активированный протеин С, и, следовательно, повышается вязкость крови. У гетерозиготных носителей венозное свертывание увеличено в 5-10 раз. Риск развития заболевания у женщин, которые принимают контрацептивные средства, возрастает в 50 раз. В случае гомозиготного носительства риск в 50-100 раз выше, чем у женщин с обычным аллельным типом. Распространенность мутации фактора V Ляйдена среди больных венозным тромбозом равняется 20-60%. Поскольку мутация связана с аутосомальным доминантным заболеванием, настоятельно рекомендуется включить в диагностику ближайших членов семьи. После первого проявления тромбоза носители мутации должны пройти курс терапии. Но не рекомендуется проводить профилактические мероприятия у бессимптомных носителей.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. При помощи метода ПЦР и анализа рестрикционных фрагментов тест позволяет достоверно определить гомо- и гетерозиготные перестройки Г-А в гене фактора V, что приводит к замене аминокислоты аргинина на глютамин. Специфичность теста составляет почти 100%.

Срок выполнения 14 дней

Определение и диагностическое значение

Один из 500 индивидов в популяции имеет наиболее распространенное метаболическое нарушение. Для выделения группы риска установлены следующие критерии:

• Общий уровень холестерола >7,0 ммоль/л или уровень LDL >4.5 ммоль/л плюс наличие, по крайней мере, 1-го члена семьи, который имел сердечные приступы до 60 лет, или наличие родственников с общим уровнем холестерола >7,0 ммоль/л.
• Для детей младше 16 лет определение СГ проводится в случае превышения уровня общего уровня холестерола и LDL до 6,7 и 4,0 ммоль/л соответственно.

СГ поддается лечению, и поэтому заболевание должно диагностироваться как можно раньше. Единственным методом, позволяющим отличить спорадическую и врожденную гиперхолестеринемии, является генетический анализ. Для анализа СГ IMMD использует скрининг гена LDL-рецепторов и гена аполипопротеина B. Риск смерти от атеросклероза в четыре раза выше у больных СГ по сравнению с обычным населением. В возрасте 50 лет почти 30% больных СГ имеют атеросклероз и сердечные заболевания, а в 60 лет более чем у 50% отмечаются симптомы коронарной недостаточности. 20% пациентов, перенесших инфаркт, имеют СГ.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Используется метод Fluorescence Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) на ABI 377 или Denaturating High Pressure Liquid Chromatography (DHPLC) с помощью WAVE, а также секвенирование тех генных фрагментов, которые содержат мутации, что позволяет в точности определить ДНК-последовательность каждой мутации. Чувствительность теста 95-98%.

Срок выполнения 4-6 недель.

(Дисбеталипопротеинемия)

Определение и диагностическое значение

Уровень триглицеридов и холестерола в плазме больше 200мг/дл и наличие в семейной истории сердечно-сосудистых заболеваний являются показанием к проведению генетического теста на дисбеталипопротеинемию. Это заболевание связано с мутацией в гене аполипопротеина Е. Гомозиготные носители мутации в ApoE-2 подвергаются значительному риску атеросклероза. Симптомами является раннее развитие сердечных заболеваний с высоким процентом случаев инфаркта. Наличие мутантной формы ApoЕ-2 является основной причиной проявления дисбеталипопротеинемии, поскольку эта форма блокирует распад VLDL-частиц в крови и приводит к избытку холестерола и триглицеридов. Приблизительно 1 из 50 индивидов в общей популяции несут эту мутацию. Условием инициации начала болезни, помимо генетического дефекта, является сочетание факторов окружающей среды, таких как диета или диабет. Генетическое тестирование позволяет определить группу риска среди пациентов и их родственников, которые претендуют на проведение соответствующих профилактических мероприятий.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. При помощи метода ПЦР и анализа рестрикционных фрагментов, можно достоверно обнаружить мутации ApoЕ-2 в гетерозиготном и гомозиготном состоянии (Arg158>Сys). Параллельно определяются аллели ApoЕ-3 и ApoЕ-4 .

Срок выполнения - 14 дней.

(Синдром Жильбера)/Токсичность Иринотекана

Определение и диагностическое значение

Семейная негемолитическая гипербилирубинемия (Синдром Жильбера):

Врожденная негемолитическая низкодифференцированная гипербилирубинемия у пациентов с синдромом Жильбера связана с мутацией в ТАТА-блоке против хода транскрипции уридин 5`-дифосфоглюкозы глюкуронозилтрансферазы гена UGT1A1. От контроля (здоровых людей) такие случаи отличаются гомозиготным генотипом (TA)(7)TAA с дополнительным ТА-динуклеотидом. У носителей этой мутации снижен синтез фермента и, соответственно, снижена ферментативная активность, которая приводит к ослаблению глюкуронидации билирубина. Гомозиготный генотип при болезни Жильбера встречается у 5-12% европейского населения. Однако существуют другие генетические и негенетические факторы, которые влияют на ход заболевания.

Химиотерапия Иринотеканом:

Фермент UGTA1 также играет важную роль в реакции на противоопухолевые лекарства, потому как они в основном конъюгированы с UGT1A1. Онкологические больные с генотипом, который обуславливает синдром Жильбера, являются претендентами на проведение химиотерапии Иринотеканом. В частности, определение генотипа (TA)(7)TAA позволяет спрогнозировать острую токсичность иринотекана у онкологических больных. Следовательно, генетический тест клинически важен для прогноза острого косвенного воздействия и токсичности препарата.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Методы ПЦР и анализа фрагментов на ABI – секвенаторе позволяет достоверно определить варианты последовательностей в промоторе гена UGT1A1. Специфичность диагноза составляет почти 100% .

Срок выполнения 18 дней.

Определение и диагностическое значение

Синдром ломкой Х-хромосомы является наиболее частой из всех генетических заболеваний причиной умственной отсталости. Приблизительно 1 из 880 индивидов в общей популяции имеет это заболевание. Клинический фенотип - врожденные морфологические пороки и увеличение яичек у взрослых. Поставить диагноз, основываясь на клинических симптомах у новорожденных, трудно. Позже у детей расстройство проявляется более четко в дефиците внимания, гиперактивности, избегании зрительного контакта или быстрой речи с заиканием. Также может быть увеличена окружность головы, гипотония.

Болезнь поражает человека, независимо от его пола. Однако если мутантный ген унаследован от матери, риск намного выше.

Причиной болезни является повышение количества тринуклеотидных повторов (ЦГГ копий) в гене FMR1. Пациенты с более чем 200 повторами достоверно имеют синдром ломкой Х хромосомы. Тест позволяет определить количество подобных повторов.

Образцы и метод анализа

Необходимо 5 - 10 мл крови на EDTA (без тестовой бумаги). Количество ЦГГ-повторов определяется методами ПЦР и блоттинга по Саузерену.

Срок выполнения - 3 недели.

(Скрининг мутаций в гене GLI3)

Определение и диагностическое значение

Одиночные мутации в гене GLI3 отвечают за ряд определенных генетических синдромов, которые передаются потомкам аутосомно-доминантным путем:

• Цефалополисиндактилия Грейга
• Синдром Палистера-Холла (СПХ)
• Постаксиальная полидактилия тип А (РАР-А)
• Преаксиальна полидактилия тип IV (PPD IV)

Пациенты с одним из этих синдромов имеют нормальный кариотип по заключению хромосомного анализа. Чтобы подтвердить клинический диагноз, необходимо провести скрининг связанных с заболеванием мутаций в гене GLI3. Таким образом, спектр клинических симптомов достаточно разнообразен даже у родственников, однако, общей для большинства случаев является деформация конечностей, в частности полидактилия. Все заболевания, связанные с мутациями в гене GLI3, являются аутосомно-доминантными расстройствами с высокой пенентрантностью.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Тест ПЦР включает секвенирование ДНК всех 15 экзонов, включая границы интронов и экзонов гена GLI3. Специфичность близка к 100%.

Срок выполнения - 4 недели.

Определение и диагностическое значение

Уровень распространенности составляет 10-20%, то есть желчнокаменная болезнь - одна из самых распространенных болезней в развитых странах. Была описана наследственная форма, которая связана с молекулой транспорта холестерола, локализованной в клетках желудочного тракта. Присутствие генетического варианта D19H в гене ABCG8 коррелирует с наличием камней в желчном пузыре, соответственно это позволяет диагностировать наследственную форму желчнокаменной болезни независимо от возраста. Риск развития заболевания среди носителей рисковой аллели 19H в 3 раза выше по сравнению с носителями нормального типа аллели 19D. Генетический тест помогает обнаружить риск развития заболевания в семьях с частыми случаями желчнокаменной болезни, а также определить форму заболевания - спорадическую или наследственную.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Методы ПЦР и рестрикционного анализа фрагментов позволяет достоверно определить гомо- и гетерозиготные 55G >С переходы (D19H) в экзон 1 гена ABCG8. Специфичность диагностики достигает почти 100%.

Срок выполнения - 14 дней.

Определение и диагностическое значение

Наследственный гемохроматоз провоцируется гомозиготной мутацией гена HLA. Один человек из 400 имеет наследственный гемохроматоз, поэтому заболевание является наиболее распространенным моногенным метаболическим расстройством. В результате мутации происходит накопление железа в печени, сердце, поджелудочной железе, эндокринных железах и коже. Общими проявлениями является цирроз, кардиомиопатия, сахарный диабет, гипогонадизм, пигментация кожи и артрит. Генетическое исследование позволяет обнаружить мутации у пациентов еще до того, как болезнь полностью разовьется. Поскольку гемохроматоз – это потенциальное смертельное заболевание, генетический тест делает возможным раннее предотвращение этой болезни, например, путем венесекции, еще до повреждения органа.

Причиной является гомозиготная замена Г-А в позиции мутации 845 в гене HLA.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Метод ПЦР и рестрикционный анализ фрагментов позволяет достоверно определить гомо- и гетерозиготные замены Г>А в позиции 845, что является причиной обмена Cys282tyr в гене HLA. Специфичность диагностики достигает почти 100%.

Срок выполнения - 14 дней.

(Дефицит метилен-тетрагидрофолат-редуктазы - MTHFR)

Определение и диагностическое значение

Дефицит MTHFR является наиболее распространенным генетически обусловленным нарушением метаболизма фолиевой кислоты. Приблизительно 12% населения имеет мутацию, ассоциированную с заболеванием, в гомозиготном состоянии. Мутация также приводит к ингибированию фермента MTHFR, и, как следствие, к повышению гомоцистеина в плазме. Повышение уровня цистеина является независимым фактором риска развития атеросклероза, подобно курению или гиперхолестеринемии. Независимые исследования показывают наличие корреляции между повышенным уровнем цистеина в плазме и сниженной концентрацией фолиевой кислоты у носителей гомозиготной мутации MTHFR. Таким пациентам рекомендована заместительная терапия, которая включает фолиевую кислоту, витамин B12 и B6. Мутация (C677t) в гене метилентетрагидрофолат редуктазы (ген MTHFR) приводит к потере ферментативной активности и, как следствие, к повышению уровня гомоцистеина.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD. Методы ПЦР и рестрикционного анализа фрагментов позволяют достоверно обнаружить гомо- и гетерозиготные замены G>Т в позиции 677 в кодирующем участке гена MTHFR. Специфичность диагностики достигает почти 100%.

Срок выполнения - 14 дней.

Определение и диагностическое значение

Непереносимость лактозы вызвана дефицитом фермента лактазы и является одним из наиболее распространенных в мире ферментных дефицитов генетического происхождения. Единственная мутация в гене лактазы делает невозможным расщепление лактозы. Поэтому лактоза накапливается в толстом кишечнике, где ее частично метаболизируют кишечные бактерии. Продукты ферментации вызывают различные симптомы, как, например, метеоризм, боли в животе.

Генетический тест – единственный метод различить первичный дефицит лактазы (которые спровоцирован генетическим дефектом) и вторичный, который диагностируется с помощью биохимического анализа. В отличие от вторичной формы непереносимости лактозы, которая обычно временная, первичная форма требует безлактозной диеты на протяжении всей жизни.

Образцы и метод анализа

Необходима проба крови на тестовой бумаге IMMD. Исследование на основе метода ПЦР включает ферментативное расщепление и электрофоретический анализ фрагментов ДНК, которые содержат мутацию Ц/Т в положении – 13910 гена LCT.

Срок выполнения - 14 дней.

Типирование HLA DQ

Определение и диагностическое значение

Целиакия или глютен-чувствительная энтеропатия - это хроническое заболевание, которое характеризуется воспалением, атрофией ворсинок, и гиперплазией крипт слизистой оболочки тонкой кишки, и провоцируется генетическими факторами и факторами окружающей среды. Поражение слизистой оболочки происходит у генетически предрасположенных лиц после включения в рацион глютена и восстанавливается, когда из рациона исключаются злаки, пшеница, рожь и ячмень, которые содержат глютен. Основным фактором, который провоцирует заболевание, является молекула глютена, а именно, его спирторастворимая фракция – глиадин. Популяционные скрининговые исследования показали, что, по меньшей мере, 0,5% взрослого населения Западных стран имеют это заболевание. Восприимчивость к целиакии в значительной степени определяется генетическими факторами. Склонность к целиакии характерна для всех членов семьи, и конкордатность (совпадение) по целиакии у родственников первой степени колеблется в пределах 10-15% и достигает 80% у монозиготных близнецов. Ген восприимчивости к целиакии локализован в HLA области хромосомы 6. Приблизительно 90% больных целиакией пациентов имеют DR3 HLA HLA-DQ2 конфигурацию (закодированы аллелями DQA1*0501 и DQB1*0201), а большинство других имеют DR4-DQ8 гаплотип, закодированный DQA1*0301, DQB1*0302 аллелями.

Образцы и метод анализа

Необходимо 3 мл крови из EDTA. Применяется метод ПЦР.

Срок выполнения - 3 недели.

Определение и диагностическое значение

Согласно многим эпидемиологическим исследованиям, ЛПВГ в низких концентрациях (<1.5 ммоль/л или <58 мг/дл) является независимым фактором риска для сердечно-сосудистых заболеваний. Мутации в гене печеночной липазы вместе с другими факторами способствуют снижению концентрации липопротеинов высокой плотности. Фермент LIPC – плазменный липолитический фермент, который принимает участие в метаболизме липопротеинов средней плотности и крупных липопротеинов низкой плотности к более мелким липопротеинам низкой плотности, а также в превращении липопротеинов высокой плотности 2 в липопротеины высокой плотности 3. Обычная мутация в участке 5`конца HL-гена - 514 (Ц/Т) связана с нарушением метаболизма липопротеинов высокой плотности. Пациенты, которые несут генотип ЦЦ, отвечают на повышенное содержание жира в их диетах повышением концентрации липопротеинов высокой плотности и холестерина. Напротив, при генотипе TT происходит снижение уровня липопротеинов высокой плотности и холестерина. Таким образом, генетический тест определяет пациентов, предрасположенных к диетически обусловленному атеросклерозу.

Образцы и метод анализа

Необходима проба крови на тестовой бумаге IMMD. Тест на основе метода ПЦР с использованием рестрикционного анализа фрагментов с помощью NIaIII, позволяет достоверно идентифицировать генотипы Ц/Ц и Ц/Т. Специфичность близка к 100 %.

Срок выполнения - 18 дней.

Определение и диагностическое значение

Инфантильная прогрессирующая мышечная дистрофия Дюшенна (DMD) – это наследственная X-сцепленная миопатия, которая приводит к значительному снижению продолжительности жизни. Поражает только мальчиков. DMD вызывается делециями (60%), дупликациями (5%) или точечными мутациями (30 %) в гене дистрофина. Как следствие – нехватка дистрофина в мышечных клетках. Это приводит к проявлению ранних симптомов начала дистрофичных изменений бедра, задержки статомоторного развития, частого спотыкания и трудностей при вставании на ноги.

Наследственная миопатия Беккера (BMD), также вызвана дефектами в гене дистрофина. Эти дефекты все же позволяют организму частично синтезировать дистрофин, что сопровождается более умеренными симптомами, и обеспечивает большую продолжительность жизни.

Образцы и метод анализа

Необходима кровь с EDTA.
Анализ в соответствии с симптоматическими показаниями:
ПЦР-исследование делеций и дупликаций, которые вызывают заболевание, в гене дистрофина. Специфичность исследования составляет приблизительно 98 %.

Срок выполнения - 18 дней.

Оценка статуса носителя:

Мутация передается Х-хромосомой (от матери) к сыну. Анализ охватывает членов семьи, которые страдают данным заболеванием и у которых установлены генетические изменения, с целью сравнения их с геном дистрофина пациента, у которого подозревают наличие мутации.

Срок выполнения - от 2 до 4 недель, в зависимости от количества тестируемых людей.

Определение и диагностическое значение

Янус-киназа 2 (JAK2) является тирозинкиназой, которая играет важную роль в регуляции нормальной пролиферации гемопоэтических клеток. Одна единственная соматическая мутация Val617Phe в экзоне 12 JAK2 существенно активизирует киназу, что способствует развитию миелопролиферативного заболевания путем клонального роста гемопоэтических клеток. По сообщению Lancet 365, 1054 (2006), JAK2 мутации помогают диагностировать пациентов с основными миелопролиферативными заболеваниями, такими как полицитемия Вера (до 97 % пациентов – носители мутации), эссенциальная тромбоцитемия (носители встречаются в 57% случаев) и идиопатический миелофиброз (приблизительно в 50% случаев). Для носителей характерно более пролонгированное течение болезни, и более тяжелые осложнения (N. Engl. J. Med 352,1779, 2005). У пациентов с ХМЛ мутация не обнаружена.

Образцы и метод анализа

Необходимы или клетки костного мозга или периферическая кровь на гепарине. Также необходимо отправить клетки костного мозга или периферической крови в гепарине. Аллель-специфическая ПЦР позволяет достоверно определить мутацию Val617Phe в экзоне 12 JAK2-генов. При условии, что, по крайней мере, 15 % клеток содержат мутацию, специфичность исследования приближается к 100 %.

Срок выполнения - 18 дней.

Определение и диагностическое значение

Международные исследования показывают, что около 30% женщин в возрасте после менопаузы являются носителями мутации “гена коллагена типа 1 альфа 1”. Эта мутация, очевидно, является причиной деминерализации кости и частых остеопорозных переломов. Генетический тест, который можно проводить независимо от возраста, позволяет идентифицировать женщин, у которых риск остеопороза выше в три раза. Их дочери с помощью теста могут больше узнать о своем собственном (в перспективе) риске.

При положительном результате теста рекомендуется проведение последующих диагностических (например, определение плотности кости) мероприятий. Носителям генов рекомендуется гормональная заместительная терапия, а также соблюдение мер предосторожности.

Образцы и метод анализа

Необходима тестовая бумага IMMD для анализа крови. Методы ПЦР и рестрикционного анализа фрагментов позволяют достоверно идентифицировать гомо- и гетерозиготные замены G>T в пределах первого интрона гена COL1A1. Специфичность диагностики составляет почти 100%.

Срок выполнения - 14 дней.

Определение и диагностическое значение

Заболевания, характеризующиеся задержкой умственного развития, сопровождаются тяжелой гипотонией и слабым сосательным рефлексом в детстве. СПВ - наиболее частая патология, которая спровоцирована аберрацией в хромосомах отца. СА обуславливает более тяжелую степень умственной задержки и вызывается изменениями в материнских хромосомах. Тест на метилирование ДНК доказывает присутствие или отсутствие правильных метилированных фрагментов в соответствующих локусах хромосомы 15. Если результат позитивный, необходимо провести последующий анализ с помощью маркеров микросателлитов, который должен показать молекулярную основу аберрации (делеции, однородительская дисомия или ошибки импринтинга).

Образцы и метод анализа

Для анализа используется проба EDTA-крови. Комбинация методов метилирования и анализа микросателлитов обеспечивает высокую чувствительность и специфичность диагностических результатов. Чувствительность метода - 99% для СПВ и 75% для СА.

Срок выполнения - 4 недели.

Определение и диагностическое значение

Единственная мутация в гене фактора коагуляции II (протромбин) - 20210G>A, приводит к увеличению уровня протромбина в плазме. У пациентов, которые имеют эту мутацию, риск тромбоза глубоких вен увеличивается в 3 раза. У курящих молодых женщин это является причиной повышения частоты возникновения инфаркта в 6 раз. Частота тромбоза вен мозга в 10 раз выше у носителей генов по сравнению с пациентами, которые не имеют этой мутации. Кроме того, прием противозачаточных средств также способствует увеличению этого риска в 120 раз. Пациенты, которые являются носителями одновременно и фактора V Лейдена, и мутации протромбина (почти 40% всех проверенных людей), имеют самый высокий риск развития заболевания. Поэтому, для пациентов с венозным тромбозом в семейном анамнезе, настоятельно рекомендуется анализ на обе мутации.

Образцы и метод анализа

Пробу крови на тестовой бумаге IMMD необходимо отправить в нашу лабораторию. Методы ПЦР и ферментативного расщепления позволяют достоверно определить 20210G>A замены оснований в гене протромбина.

Срок выполнения - 14 дней.

Определение и диагностическое значение

Синдром Сильвера-Рассела сопровождается такими клиническими проявлениями как, например, задержка роста или признаками диморфизма и билатеральной асимметрией. Основным генетическим основанием является, скорее всего, гетерогенность. Приблизительно в 10% всех случаев можно определить однородительскую дисомию по хромосоме 7 (UPD7). Поэтому, для постановки дифференциального диагноза, с учетом врожденных проявлений, задержки роста, настоятельно рекомендуется проведение хромосомного анализа, связанного с UPD7.

Образцы и метод анализа

Для проведения теста необходимо 0,5-3,0 мл крови на EDTA. Образцы должны быть доставлены в нашу лабораторию в течение 48 часов после забора крови. Тестовую бумагу для пробы крови в данном случае использовать нельзя! Исследование заключается в сравнении 7-ой хромосомы обоих родителей такого ребенка. С этой целью используют высокополиморфные маркеры (STRs) для амплификации соответствующих участков хромосом, для последующего анализа их на 310 ДНК-секвенаторе.

Пожалуйста, учтите, что необходимы образцы крови ребенка и обоих родителей.

Срок выполнения - 18 дней.

Определение и диагностическое значение

Однородительская дисомия, проявляется, когда обе хромосомы ребенка имеют тот же гаплотип, что и пара хромосом одного из родителей. Другими словами, ребенок несет хромосомы или только отца, или только матери. UPD определены для большинства хромосом. UPD – является причиной небольшого количества четко определенных клинических показаний, включая следующие синдромы:

• Синдром Прадера-Вилли (UPD15)
• Синдром Ангельмана (UPD15)
• Синдром Беквита-Видемана (UPD11)
• Синдром Сильвера-Рассела (UPD7)
• Транзиторный неонатальный диабет (UPD6)

Первые три синдрома могут также быть спровоцированы двумя генетическими дефектами (см. соответствующие предложения относительно тестов). Кроме вышеупомянутых патологических состояний, другие UPDs могут быть также причиной аномалий (внутриматочная и послеродовая задержка роста, умственная отсталость, врожденные дефекты и диморфные признаки).

Более поздние симптомы UPD – плацентарная дисфункция в результате мозаицизма, определение дополнительных хромосомных маркеров или гомологических транслокаций в 14 и 15 хромосомах.

Образцы и метод анализа

Однородительская дисомия определяется на молекулярном уровне путем использования полиморфных маркеров, что позволяет установить, имеют ли обе хромосомы ребенка такой же гаплотип, как одна из хромосом одного из родителей (изодисомия), или две хромосомы имеют тот же гаплотип, что и пара хромосом от одного из родителей (гетеродисомия). Для этого синтезируют ПЦР-фрагменты в соответствии с микросателлитными маркерами и генотипируют с помощью ABI- секвенатора.
Необходима тестовая бумага IMMD для пробы крови.

Срок выполнения - 14 дней.

Определение и диагностическое значение

Существует несколько генов, расположенных в области эухроматина длинного плеча хромосомы Y; они играют существенную роль в сперматогенезе. Фактически, приблизительно 7% всех мужчин, которые страдают бесплодием, имеют делеции в «участке фактора азооспермии (AZF)». Особенно мужчины с концентрацией спермы <5х10⁶/мл имеют этот тип генных делеций, что позволяет определить генетический тест.

Образцы и метод анализа

Необходима проба крови на тестовой бумаге IMMD. Тест включает комбинацию мультиплексной ПЦР с праймерами, которые охватывают участок q11 AZF (AZFa, AZFb, AZFc), и электрофоретический гелевый анализ. Согласно европейским стандартам (www.emqn.org/guidelines), чувствительность анализа составляет > 90 %.

Срок выполнения - 18 дней.